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泡菜废水处理
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泡菜废水处理

    高盐废水是指盐度(以 NaCl计)至少为10%(质量分数)的废水,主要包括含盐工业废水、含盐生活污水和其他含盐废水。四川泡菜是具有地方特色的发酵蔬菜制品,泡制泡菜后的高盐废水通常盐度达到5.0%左右,其中含有大量的嗜盐菌。
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       高盐废水是指盐度(以 NaCl计)至少为10%(质量分数)的废水,主要包括含盐工业废水、含盐生活污水和其他含盐废水。四川泡菜是具有地方特色的发酵蔬菜制品,泡制泡菜后的高盐废水通常盐度达到5.0%左右,其中含有大量的嗜盐菌。由于嗜盐菌具有特殊的结构和理化性质,能抵抗高盐浓度环境胁迫,不易污染,可减少发酵工艺,降低成本,因此常用于发酵生产。嗜盐菌种类繁多,它们的分类主要依据三个方面:表型特征、化学分类数据和分子生物学数据。
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       嗜盐菌的分离和菌体的培养 
  将冷冻保藏的高盐废水置于培养箱中解冻活化,取0.1mL到EP管中,再加入0.9mL已灭菌的蒸馏水,用漩涡振荡器混合均匀。从中取200μL均匀涂布于LB培养基(其中 NaCl浓度为15% )上,37℃倒置培养48h。从长出的菌中挑选20株长势较好的菌株转接到新的LB培养基上,并对每一株菌进行编号。
       再对每株菌进行反复划线,直到得到单菌落。最后将分离得到的菌划线于保藏管中保藏待用。配制液体LB培养基300mL,分别置于3个三角瓶中,选取3株长势较好,差异较大的菌分别接种于3个三角瓶中,并作好标记,于37℃,200r/min摇床培养,17h 。
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       16SrDNA序列及系统发育分析
       基因组DNA的提取和16SrDNA的扩增及序列分析参见Toru Shigematsu等方法。引物采用细菌16SrDNA PCR 扩 增 通 用 引 物 Eu27F ( 5′ - AGAGTTTGATCCTGGCTCAG - 3′ , 10 μ M )和原核微生物特异引物 1490R(5′ - GGTTACCTTGT TACGACTT - 3′ , 10 μ M )。PCR扩增条件:94℃ 变性 1min , 50℃ 退火 1.5min , 72℃ 延伸2min , 30 个循环。 PCR 产物经 pGEM - T 载体 T - A 克隆入 E . coli  DH 5α ,挑选阳性菌落,提取重组质粒。将质粒送 invitrogen 公司进行序列测定,并将测得的序列去载体后提交到 NCBI进行比对,将所测序结果与数据库中已知序列在GenBank 数据库中比对,获得与实验菌株相似的典型菌株 16SrDNA 序列,选取序列用 Clustal X 和MEGE 4.0绘制系统发育树,对所构建的系统发育树评估。
        三、结果
        1.嗜盐菌的分离结果
        划线分离后得到的单菌落和最终分离得到的20株单菌。由图1,图2可知,分离得到的这20株单菌株有一定的耐盐性,能在含盐量为15%的 LB培养基上生长;嗜盐菌菌落部分为白色,部分为黄色,扁平,表面光滑,湿润,直径在1~2mm 左右。挑选出差别较大菌株分别命名为 MS1 、 MS2 、 MS3 。

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